一,、石蠟切片厚度一般為多少
石蠟切片厚度通常為4~7微米,,切出一片接一片的蠟帶,,用毛筆輕托輕放在紙上。這個厚度通??梢詽M足大部分實驗室的需求,。如果需要更薄的切片厚度,則可以使用微切機進行切割,,厚度可達1-2微米,,但這種切片會更脆弱,操作難度更大,。
二,、石蠟切片制作過程是什么
石蠟切片的制作步驟如下:
1、組織包埋
(1)乙醇脫水:組織經(jīng)不同濃度的乙醇溶液進行逐級脫水70%,、80%,、90%、95%,、100%,、100%,各級乙醇 40min(注意:骨性及鈣化組織需在JYBL-Ⅱ脫鈣液中浸泡24h,待組織軟化后再進行乙醇脫水步驟),。
(2)透明:組織依次浸泡于三個二甲苯中,,每缸各1h。
(3)浸蠟:組織依次浸泡于三個石蠟缸中,,每缸各1h,。
(4)包埋:將液態(tài)的石蠟倒入模具盒中,再將浸好蠟的組織塊平放底部,,注意切面方向朝下放置,,待石蠟凝固后去掉包埋框,完全冷卻變硬后再修整蠟塊,,組織外圍的石蠟保留適中以便切片,。
2、切片與貼片
切片制作將預冷的蠟塊固定在石蠟切片機上,,使石蠟塊的切面與刀口成平行方向,,刀的傾斜度通常15℃,轉(zhuǎn)動輪轉(zhuǎn)推進器,,調(diào)節(jié)切片厚度為4μm,,切成厚度均勻的切片。
左手持毛筆,,右手旋動切片機轉(zhuǎn)把,,切片帶出來之后,用毛筆輕輕托起,,再用鑷子輕鑷蠟片,,以正面放入展片箱中,其水溫45℃左右,。待攤平整后撈片,。貼附切片左手持載玻片之一端,垂直入水去附貼切片,,右手用鑷子輔助推動,,附貼至玻片上的三分之二處。切片貼附后,,放在空氣中稍晾干,,放置65℃烤片機上烤1h,再放置烘箱內(nèi)烘烤2h,。
3,、石蠟切片脫蠟至水
依次將石蠟切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-二甲苯Ⅲ10min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-50%酒精5min梯度脫蠟。
4,、HE染色
石蠟切片入蘇木素染0.5-1分鐘min,自來水漂洗,1%鹽酸酒精分化數(shù)秒,,自來水漂洗,,然后1%氨水水溶液返藍1min,流水沖洗數(shù)秒,,放入伊紅染液中染色數(shù)秒,,流水漂洗。
5,、脫水封片
石蠟切片依次放入75%乙醇2min-85%乙醇2min-無水乙醇5min-無水乙醇5min-二甲苯5min透明,,將切片從二甲苯拿出來中性樹膠封片。