一,、石蠟切片厚度一般為多少
石蠟切片厚度通常為4~7微米,,切出一片接一片的蠟帶,用毛筆輕托輕放在紙上,。這個(gè)厚度通??梢詽M足大部分實(shí)驗(yàn)室的需求。如果需要更薄的切片厚度,,則可以使用微切機(jī)進(jìn)行切割,,厚度可達(dá)1-2微米,但這種切片會(huì)更脆弱,,操作難度更大,。
二、石蠟切片制作過(guò)程是什么
石蠟切片的制作步驟如下:
1,、組織包埋
(1)乙醇脫水:組織經(jīng)不同濃度的乙醇溶液進(jìn)行逐級(jí)脫水70%,、80%,、90%、95%,、100%,、100%,各級(jí)乙醇 40min(注意:骨性及鈣化組織需在JYBL-Ⅱ脫鈣液中浸泡24h,,待組織軟化后再進(jìn)行乙醇脫水步驟),。
(2)透明:組織依次浸泡于三個(gè)二甲苯中,每缸各1h,。
(3)浸蠟:組織依次浸泡于三個(gè)石蠟缸中,,每缸各1h。
(4)包埋:將液態(tài)的石蠟倒入模具盒中,,再將浸好蠟的組織塊平放底部,,注意切面方向朝下放置,待石蠟?zāi)毯笕サ舭窨?,完全冷卻變硬后再修整蠟塊,,組織外圍的石蠟保留適中以便切片。
2,、切片與貼片
切片制作將預(yù)冷的蠟塊固定在石蠟切片機(jī)上,,使石蠟塊的切面與刀口成平行方向,刀的傾斜度通常15℃,,轉(zhuǎn)動(dòng)輪轉(zhuǎn)推進(jìn)器,,調(diào)節(jié)切片厚度為4μm,切成厚度均勻的切片,。
左手持毛筆,,右手旋動(dòng)切片機(jī)轉(zhuǎn)把,切片帶出來(lái)之后,,用毛筆輕輕托起,,再用鑷子輕鑷蠟片,以正面放入展片箱中,,其水溫45℃左右,。待攤平整后撈片。貼附切片左手持載玻片之一端,,垂直入水去附貼切片,,右手用鑷子輔助推動(dòng),附貼至玻片上的三分之二處,。切片貼附后,,放在空氣中稍晾干,放置65℃烤片機(jī)上烤1h,,再放置烘箱內(nèi)烘烤2h,。
3、石蠟切片脫蠟至水
依次將石蠟切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-二甲苯Ⅲ10min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-50%酒精5min梯度脫蠟,。
4,、HE染色
石蠟切片入蘇木素染0.5-1分鐘min,自來(lái)水漂洗,,1%鹽酸酒精分化數(shù)秒,,自來(lái)水漂洗,,然后1%氨水水溶液返藍(lán)1min,,流水沖洗數(shù)秒,放入伊紅染液中染色數(shù)秒,,流水漂洗,。
5、脫水封片
石蠟切片依次放入75%乙醇2min-85%乙醇2min-無(wú)水乙醇5min-無(wú)水乙醇5min-二甲苯5min透明,,將切片從二甲苯拿出來(lái)中性樹(shù)膠封片,。