一、分光光度計(jì)是測什么的

分光光度計(jì),，又稱光譜儀（spectrometer）,，是將成分復(fù)雜的光，分解為光譜線的科學(xué)儀器,。分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,，對該物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析。常用的波長范圍為：200～380nm的紫外光區(qū),，380～780nm的可見光區(qū),，2.5～25μm（按波數(shù)計(jì)為4000cm～400cm）的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計(jì),、可見光分光光度計(jì)（或比色計(jì)）,、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)。為保證測量的精密度和準(zhǔn)確度,，所有儀器應(yīng)按照國家計(jì)量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定,，定期進(jìn)行校正檢定,。

分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器,。常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量,。儀器主要由光源,、單色器、樣品室,、檢測器,、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成。

二、光譜儀和分光光度計(jì)區(qū)別

“光譜儀”和“分光光度計(jì)”是同一類儀器,，但是“光譜儀”的名稱之前是不需要冠之以“分光”的,，因?yàn)橐氲玫焦庾V，就必須分光,。光度計(jì)可以是積分光度計(jì)（光強(qiáng)計(jì)）,，不需要分光；一旦分光,，它就是“光譜儀”,。另外，“光譜儀”和“分光光度計(jì)”的結(jié)構(gòu)區(qū)別是：“光譜儀”分光不需要掃描（如CCD光譜儀）,，工作速度快,；“分光光度計(jì)”分光需要掃描，工作速度慢,。

三,、分光光度計(jì)的組成部分

1、光源

在吸光度的測量中,，要求光源發(fā)出的所需波長范圍內(nèi)的連續(xù)光譜具有足夠的光強(qiáng)度,，并能在一定時(shí)間內(nèi)保持穩(wěn)定。

2,、單色器

單色器是能將光源發(fā)射的連續(xù)光源分解為單色光并從中選出任一波長單色光的光學(xué)系統(tǒng),。它由入射狹縫、準(zhǔn)光器,、色散原件,、聚焦元件和出射狹縫等幾個(gè)部分組成。

3,、吸收池

吸收池又稱比色皿,，用于盛裝參比溶液和待測試液。儀器一般配有液層厚度為0.5cm,、1cm,、2cm、3cm等的長方形比色皿,。

4,、檢測系統(tǒng)

檢測系統(tǒng)通常通過利用光電效應(yīng)將透過吸收池的光信號轉(zhuǎn)變?yōu)榭蓽y的電信號，而且所產(chǎn)生的電信號應(yīng)與照射于檢測器上的光信號成正比,?？梢姺止夤舛扔?jì)常常使用光電管或光電倍增管做檢測器。

5,、信號顯示系統(tǒng)

光電轉(zhuǎn)換器產(chǎn)生的各種電信號,，經(jīng)放大等處理后,，用一定方式顯示出來，以便于計(jì)算和記錄,。

四,、分光光度計(jì)原理

分光光度計(jì)的原理是采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長的光源，通過系列分光裝置,，從而產(chǎn)生特定波長的光源,，光線透過測試的樣品后，部分光線被吸收,，計(jì)算樣品的吸光值,，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度，樣品的吸光值與樣品的濃度成正比,。

五,、分光光度計(jì)的種類

1、可見分光光度計(jì)

用來測量待測物質(zhì)對可見光的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器,，稱為可見分光光度計(jì),。

2、紫外可見分光光度計(jì)

紫外可見光譜儀用來測量待測物質(zhì)對可見光或紫外光（200-760nm）的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器,，可以測定核酸和蛋白的濃度,，也可以測定細(xì)菌細(xì)胞密度。

3,、紅外分光光度計(jì)

一般的紅外光譜是指大于760nm的紅外光譜,，這是研究有機(jī)化合物最常用的光譜區(qū)域，能分析各種狀態(tài)（氣,、液,、固）的試樣。

4,、熒光分光光度計(jì)

熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器,，應(yīng)用于科研、化工,、醫(yī)藥,、生化、環(huán)保以及臨床檢驗(yàn),、食品檢驗(yàn),、教學(xué)實(shí)驗(yàn)等領(lǐng)域，通過對這些參數(shù)的測定,，不但可以做一般的定量分析,，而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,，從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系,。

六,、分光光度計(jì)使用步驟方法

1、接通電源,，打開儀器開關(guān),，掀開樣品室暗箱蓋，預(yù)熱10分鐘,。

2,、將靈敏度開關(guān)調(diào)至“1”檔（若零點(diǎn)調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0”時(shí)，需選用較高檔,。）

3,、根據(jù)所需波長轉(zhuǎn)動波長選擇鈕。

4,、將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處,，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內(nèi),，使空白管對準(zhǔn)光路,。

5、在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點(diǎn)調(diào)節(jié)器,，使讀數(shù)盤指針指向t=0處,。

6、蓋上暗箱蓋,，調(diào)節(jié)“100”調(diào)節(jié)器,，使空白管的t=100，指針穩(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿,，分別讀出測定管的光密度值,，并記錄。

7,、比色完畢,，關(guān)上電源，取出比色皿洗凈,，樣品室用軟布或軟紙擦凈,。

七、分光光度計(jì)使用注意事項(xiàng)

1,、該儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi),，使用時(shí)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺上，室內(nèi)照明不宜太強(qiáng),。熱天時(shí)不能用電扇直接向儀器吹風(fēng),，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。

2,、使用本儀器前,，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理,，以及各個(gè)操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前,，應(yīng)該對儀器的安全性能進(jìn)行檢查,，電源接線應(yīng)牢固，通電也要良好,，各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確,，然后再按通電源開關(guān)。

3,、在儀器尚未接通電源時(shí),，電表指針必須于“0”刻線上，若不是這種情況,，則可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調(diào)節(jié),。