一,、分光光度計是測什么的
分光光度計,,又稱光譜儀(spectrometer),是將成分復(fù)雜的光,,分解為光譜線的科學(xué)儀器,。分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,對該物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析,。常用的波長范圍為:200~380nm的紫外光區(qū),,380~780nm的可見光區(qū),2.5~25μm(按波數(shù)計為4000cm~400cm)的紅外光區(qū),。所用儀器為紫外分光光度計,、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計,。為保證測量的精密度和準(zhǔn)確度,,所有儀器應(yīng)按照國家計量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定,定期進(jìn)行校正檢定,。
分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器,。常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量,。儀器主要由光源,、單色器、樣品室、檢測器,、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成,。
二、光譜儀和分光光度計區(qū)別
“光譜儀”和“分光光度計”是同一類儀器,,但是“光譜儀”的名稱之前是不需要冠之以“分光”的,,因為要想得到光譜,就必須分光,。光度計可以是積分光度計(光強(qiáng)計),,不需要分光;一旦分光,,它就是“光譜儀”,。另外,“光譜儀”和“分光光度計”的結(jié)構(gòu)區(qū)別是:“光譜儀”分光不需要掃描(如CCD光譜儀),,工作速度快,;“分光光度計”分光需要掃描,,工作速度慢,。
三、分光光度計的組成部分
1,、光源
在吸光度的測量中,,要求光源發(fā)出的所需波長范圍內(nèi)的連續(xù)光譜具有足夠的光強(qiáng)度,并能在一定時間內(nèi)保持穩(wěn)定,。
2,、單色器
單色器是能將光源發(fā)射的連續(xù)光源分解為單色光并從中選出任一波長單色光的光學(xué)系統(tǒng)。它由入射狹縫,、準(zhǔn)光器,、色散原件、聚焦元件和出射狹縫等幾個部分組成,。
3,、吸收池
吸收池又稱比色皿,用于盛裝參比溶液和待測試液,。儀器一般配有液層厚度為0.5cm,、1cm、2cm,、3cm等的長方形比色皿,。
4、檢測系統(tǒng)
檢測系統(tǒng)通常通過利用光電效應(yīng)將透過吸收池的光信號轉(zhuǎn)變?yōu)榭蓽y的電信號,,而且所產(chǎn)生的電信號應(yīng)與照射于檢測器上的光信號成正比,。可見分光光度計常常使用光電管或光電倍增管做檢測器,。
5,、信號顯示系統(tǒng)
光電轉(zhuǎn)換器產(chǎn)生的各種電信號,,經(jīng)放大等處理后,用一定方式顯示出來,,以便于計算和記錄,。
四、分光光度計原理
分光光度計的原理是采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源,,通過系列分光裝置,,從而產(chǎn)生特定波長的光源,光線透過測試的樣品后,,部分光線被吸收,,計算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度,,樣品的吸光值與樣品的濃度成正比,。
五、分光光度計的種類
1,、可見分光光度計
用來測量待測物質(zhì)對可見光的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器,,稱為可見分光光度計。
2,、紫外可見分光光度計
紫外可見光譜儀用來測量待測物質(zhì)對可見光或紫外光(200-760nm)的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器,,可以測定核酸和蛋白的濃度,也可以測定細(xì)菌細(xì)胞密度,。
3,、紅外分光光度計
一般的紅外光譜是指大于760nm的紅外光譜,這是研究有機(jī)化合物最常用的光譜區(qū)域,,能分析各種狀態(tài)(氣,、液、固)的試樣,。
4,、熒光分光光度計
熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器,應(yīng)用于科研,、化工,、醫(yī)藥、生化,、環(huán)保以及臨床檢驗,、食品檢驗、教學(xué)實驗等領(lǐng)域,,通過對這些參數(shù)的測定,,不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系,。
六,、分光光度計使用步驟方法
1、接通電源,,打開儀器開關(guān),,掀開樣品室暗箱蓋,預(yù)熱10分鐘,。
2,、將靈敏度開關(guān)調(diào)至“1”檔(若零點(diǎn)調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0”時,需選用較高檔,。)
3,、根據(jù)所需波長轉(zhuǎn)動波長選擇鈕。
4,、將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處,,用擦鏡紙擦清外壁,放入樣品室內(nèi),,使空白管對準(zhǔn)光路,。
5、在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點(diǎn)調(diào)節(jié)器,,使讀數(shù)盤指針指向t=0處,。
6、蓋上暗箱蓋,,調(diào)節(jié)“100”調(diào)節(jié)器,使空白管的t=100,,指針穩(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿,,分別讀出測定管的光密度值,并記錄,。
7,、比色完畢,關(guān)上電源,,取出比色皿洗凈,,樣品室用軟布或軟紙擦凈。
七,、分光光度計使用注意事項
1,、該儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi),使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上,,室內(nèi)照明不宜太強(qiáng),。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風(fēng),防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。
2,、使用本儀器前,,使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理,以及各個操縱旋鈕之功能,。在未按通電源之前,,應(yīng)該對儀器的安全性能進(jìn)行檢查,電源接線應(yīng)牢固,,通電也要良好,,各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確,然后再按通電源開關(guān),。
3,、在儀器尚未接通電源時,電表指針必須于“0”刻線上,,若不是這種情況,,則可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調(diào)節(jié)。