一、分光光度計是測什么的

分光光度計,，又稱光譜儀（spectrometer）,，是將成分復雜的光，分解為光譜線的科學儀器,。分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,，對該物質(zhì)進行定性或定量分析。常用的波長范圍為：200～380nm的紫外光區(qū),，380～780nm的可見光區(qū),，2.5～25μm（按波數(shù)計為4000cm～400cm）的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計,、可見光分光光度計（或比色計）,、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度,，所有儀器應按照國家計量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定,，定期進行校正檢定。

分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器,。常用于核酸,，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量,。儀器主要由光源、單色器,、樣品室,、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成,。

二,、光譜儀和分光光度計區(qū)別

“光譜儀”和“分光光度計”是同一類儀器，但是“光譜儀”的名稱之前是不需要冠之以“分光”的,，因為要想得到光譜,，就必須分光。光度計可以是積分光度計（光強計）,，不需要分光,；一旦分光，它就是“光譜儀”,。另外,，“光譜儀”和“分光光度計”的結(jié)構(gòu)區(qū)別是：“光譜儀”分光不需要掃描（如CCD光譜儀），工作速度快,；“分光光度計”分光需要掃描,，工作速度慢。

三,、分光光度計的組成部分

1,、光源

在吸光度的測量中，要求光源發(fā)出的所需波長范圍內(nèi)的連續(xù)光譜具有足夠的光強度,，并能在一定時間內(nèi)保持穩(wěn)定,。

2、單色器

單色器是能將光源發(fā)射的連續(xù)光源分解為單色光并從中選出任一波長單色光的光學系統(tǒng),。它由入射狹縫,、準光器、色散原件,、聚焦元件和出射狹縫等幾個部分組成,。

3、吸收池

吸收池又稱比色皿,，用于盛裝參比溶液和待測試液,。儀器一般配有液層厚度為0.5cm、1cm,、2cm,、3cm等的長方形比色皿。

4、檢測系統(tǒng)

檢測系統(tǒng)通常通過利用光電效應將透過吸收池的光信號轉(zhuǎn)變?yōu)榭蓽y的電信號,，而且所產(chǎn)生的電信號應與照射于檢測器上的光信號成正比,。可見分光光度計常常使用光電管或光電倍增管做檢測器,。

5,、信號顯示系統(tǒng)

光電轉(zhuǎn)換器產(chǎn)生的各種電信號，經(jīng)放大等處理后,，用一定方式顯示出來,，以便于計算和記錄。

四,、分光光度計原理

分光光度計的原理是采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源,，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源,，光線透過測試的樣品后，部分光線被吸收,，計算樣品的吸光值,，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度，樣品的吸光值與樣品的濃度成正比,。

五,、分光光度計的種類

1、可見分光光度計

用來測量待測物質(zhì)對可見光的吸光度并進行定量分析的儀器,，稱為可見分光光度計,。

2、紫外可見分光光度計

紫外可見光譜儀用來測量待測物質(zhì)對可見光或紫外光（200-760nm）的吸光度并進行定量分析的儀器,，可以測定核酸和蛋白的濃度,，也可以測定細菌細胞密度。

3,、紅外分光光度計

一般的紅外光譜是指大于760nm的紅外光譜,，這是研究有機化合物最常用的光譜區(qū)域，能分析各種狀態(tài)（氣,、液,、固）的試樣。

4,、熒光分光光度計

熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器,，應用于科研、化工,、醫(yī)藥,、生化、環(huán)保以及臨床檢驗,、食品檢驗,、教學實驗等領(lǐng)域,，通過對這些參數(shù)的測定，不但可以做一般的定量分析,，而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,，從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。

六,、分光光度計使用步驟方法

1,、接通電源，打開儀器開關(guān),，掀開樣品室暗箱蓋,，預熱10分鐘。

2,、將靈敏度開關(guān)調(diào)至“1”檔（若零點調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0”時,，需選用較高檔。）

3,、根據(jù)所需波長轉(zhuǎn)動波長選擇鈕,。

4、將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處,，用擦鏡紙擦清外壁,，放入樣品室內(nèi)，使空白管對準光路,。

5,、在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點調(diào)節(jié)器，使讀數(shù)盤指針指向t=0處,。

6,、蓋上暗箱蓋，調(diào)節(jié)“100”調(diào)節(jié)器,，使空白管的t=100,，指針穩(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測定管的光密度值,，并記錄,。

7、比色完畢,，關(guān)上電源,，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈,。

七,、分光光度計使用注意事項

1、該儀器應放在干燥的房間內(nèi)，使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上,，室內(nèi)照明不宜太強,。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定,。

2,、使用本儀器前，使用者應該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理,，以及各個操縱旋鈕之功能,。在未按通電源之前，應該對儀器的安全性能進行檢查,，電源接線應牢固,，通電也要良好，各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應該正確,，然后再按通電源開關(guān),。

3、在儀器尚未接通電源時,，電表指針必須于“0”刻線上,，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進行調(diào)節(jié),。