一、基因芯片是什么
通過微加工技術(shù) ,,將數(shù)以萬計,、乃至百萬計的特定序列的DNA片段(基因探針),有規(guī)律地排列固定于2cm2 的硅片,、玻片 等支持物上,,構(gòu)成的一個二維DNA探針陣列,,與計算機的電子芯片十分相似,所以被稱為基因芯片,。
基因芯片的測序原理是雜交測序方法,,即通過與一組已知序列的核酸探針雜交進行核酸序列測定的方法,在一塊基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探針,。當(dāng)溶液中帶有熒光標(biāo)記的核酸序列TATGCAATCTAG,,與基因芯片上對應(yīng)位置的核酸探針產(chǎn)生互補匹配時,,通過確定熒光強度最強的探針位置,,獲得一組序列完全互補的探針序列。據(jù)此可重組出靶核酸的序列,。
二,、基因芯片技術(shù)原理
1、DNA探針的大量收集和純化,,基因芯片探針制備方法可以是根據(jù)基因設(shè)計特異性的PCR引物,,對基因進行特異性地擴張,也可以是建立均一化的DNA文庫,,通過克隆鑒定,、篩選、擴增產(chǎn)生,;
2,、將純化后的探針固定在片基上,首先要將基片(主要用的是玻璃片)進行特殊的化學(xué)處理,,使玻璃片醛基化或氨基化,,然后將純化的探針通過顯微打印或噴打在基片上,,再將打印好的玻璃片進行后處理,,如水合化、加熱或紫外交聯(lián)等,;
3,、樣品的標(biāo)記,標(biāo)記的方法一般是采用逆轉(zhuǎn)錄法或隨機引物延伸法等,;
4,、雜交后芯片的掃描、圖像處理的采集和數(shù)據(jù)分析,。
三,、基因芯片的特點
1、高通量,、多參數(shù)同步分析
目前基因芯片制作工藝可達(dá)到在1cm2的載體平面上固定數(shù)萬至數(shù)十萬的探針,,可對樣品中數(shù)量巨大的相關(guān)基因,甚至整個基因組及信息進行同步檢測和分析。
2,、快速全自動分析
在一定的條件下使樣品中的靶基因片段同時與芯片的多個探針進行雜交,,并采用掃描儀器測量雜交信號和分析處理數(shù)據(jù)。從而,,從根本上提高了測量工作的速度和效率,,也極大降低了測量工作的強度和難度。
3,、高精確度分析
由于芯片上的每一點,,即每個探針都可以精確定位和選址,加上每個探針都可以精確設(shè)計及制備,,因此可以精確檢測出不同的靶基因,、同一靶基因不同的狀態(tài)以及在一個堿基上的差別。
4,、高精密度分析
商品化芯片制作上的精密及檢測試劑和方法上的統(tǒng)一在一定程度上保證了芯片檢測的高精密度和重現(xiàn)性,,使不同批次乃至不同實驗室之間的檢測結(jié)果,可以進行有效比對及分析,。
5,、高靈敏度分析
基因芯片選用了不易產(chǎn)生擴散作用的載體,探針及樣品靶基因的的雜交點非常集中,,加上雜交前樣品靶基因的擴增和雜交后檢測信號的擴張,,極大地提高了檢測的靈敏度,可以檢測出1個細(xì)胞中低至1個拷貝的靶基因,,從而使檢測所需的樣品量大幅度減少,,一般只需要10~20μL樣品。